ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

    ATCC細胞株的凍存與復蘇：

    一、細胞的凍存:為避免污染造成的損失，zui小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。

    有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：

    ◆包含10%甘油的*培養(yǎng)基，

    ◆包含10%二甲基亞砜(DMSO)的*培養(yǎng)基，

    ◆50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基，或

    ◆50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。

    對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：

    ◆50%細胞條件無血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基，或

    ◆包含有7.5%二甲基亞砜和10%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。

    1.懸浮細胞

    ●計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細胞。

    ●以1×107到5×107細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以0.5×107到1×107在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。

    ●分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。

    ●細胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。

    2.貼壁細胞

    ●使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到zui小。

    ●在*生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數(shù)。

    ●以大約200g離心5分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細胞。

    ●以5×106到1×106細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。

    ●分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。

    ●細胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。